Ex Vivo试验用于药效评估案例分享和难点分析

注：本文不构成投资意见或建议；以官方/公司公告为准。本文仅是对医疗和健康相关药物的介绍，并不构成治疗计划的建议（如果相关）。平台位置。

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西宁生物

前言

随着国家药品监督管理局药品审评中心《以临床价值为导向的抗肿瘤药物临床研发指导原则》的正式发布，我国新药研发进入深水区。在设计以患者为中心的新药临床药物研发时，对照组已从常见的安慰剂变为广泛使用的最佳治疗/药物。创新药临床开发与审批规则。与此同时，新药获得批准将变得更加困难。新药在临床试验中是否有效？问题随后被新药是否比现有疗法/类似药物更有效的问题所取代。越早在临床试验的测试过程中回答有效性问题，就越能在现有政策环境下加快临床进展或及时规避风险。在早期临床试验尤其是I期临床试验中利用离体试验进行药效学评价是新药尤其是first-in-class新药常用的评价方法。作者从试验原理、案例分析和西宁生物的临床试验实践三个方面探讨了早期临床应用Ex Vivo试验的药效学评价。

临床测试原理的离体测试

与使用活性蛋白质或肿瘤细胞系的体外实验不同，体内实验使用动物或人体，体外实验则使用取自动物或人类的样本。/组织。使用体外测试模式进行检测和分析。

由于临床Ex Vivo测试模式所使用的物质是在摄入药物后从人体采集的，因此这种检测方法可以在人体复杂的免疫细胞相互作用环境中检测出药物的真实性质，相比于免疫细胞相互作用可以更真实地恢复体内环境。体外测试和生理相关性更有可能。同时，与体内试验相比，离体临床试验的测试周期更短，可以更快地获得参考数据，尤其是在健康受试者中进行的首次临床试验。在临床试验阶段，根据药物的作用机制设计合适的离体评价方案，可以获得与药物作用机制密切相关的药效学数据。临床离体测试主要使用可以以相对简单的方式从人体获得的生物材料，通常是人全血、人PBMC或人血清。人体生物材料用于测试。样品具有多种属性，例如药物成分和检测系统的重要组成部分，并且存在个体差异和采集时的状况差异。测试控制、检测条件控制、数据处理和解释都比较复杂，是变异系数最高的检测实验类型。无论是小分子、抗体、免疫调节剂还是疫苗，药物药效学都可以直接评估，也可以通过使用人全血中特定细胞亚群或成分的替代标记来评估。

早期临床阶段离体研究

药效试验案例分析

随着我国新药研发进一步加速，药物研发模式已完成从药物仿制模式向靶标跟踪模式的转变，并且随着监管政策的进一步加强，药物研发模式将进一步优化是肯定的。作者认为，后续药物研发模式将进一步优化，其中关键环节之一是利用离体研究进行早期临床药效测试和评价。下面，作者使用已发表的数据并回顾了使用离体研究进行早期药效评估的案例。案例1：抗体药物zolvetuximab（抗claudin 18.2）和cetuximab（抗EGFR）的Ex Vivo ADCC和CDC特征。抗体药物通过靶向肿瘤靶标来介导人体免疫细胞并招募它们来杀死肿瘤细胞。发挥ADCC和CDC功能是靶向抗体药物离体的主要药效机制。 ADCC和CDC功能评估是药物是否有效的重要指标。独立工作。采用细胞杀伤模型检测IMAB362药物对人体样本中PBMC介导的NUGC4杀伤作用，并采用报告基因法进行检测。

案例2：CD28免疫激动剂达沃西普（ALPN-202）的离体临床药效评价采用全血共刺激模型检测全血刺激后CD28激动剂达沃西普药物介导IL2分泌。用于检测。

案例3：C3补体抑制剂Empaveli的离体临床药效评价采用替代补体激活途径溶血模型检测Empaveli药物介导的血清在人体样本中的溶血作用。

案例4：CDK4/6抑制剂Trilaciclib的离体临床药效评价采用全血刺激模型检测Trilaciclib对人体样本中全血T细胞增殖的抑制作用。我们还使用流式细胞术方法对其进行检测。

案例5：RSV抗体Nilsevimab的离体临床药效评价

采用RSV病毒感染模型检测尼勒塞单抗对人血清样本中RSV感染细胞的抑制和中和作用，并采用细胞学方法进行检测。

案例6：COVID-19疫苗BNT162b1的离体临床药效学评价。 COVID-19刺突蛋白用于刺激PBMC模型，检测刺突蛋白RBD肽库以刺激人体样本中的CD4+和CD8+T细胞，并检测细胞介导的免疫效应。对人体样本进行ELISPOT 测试。

案例7：IL-4Ra抑制剂AZD1402的离体临床药效学评价。采用全血刺激模型检测AZD1402对人体样本中全血CD3细胞STAT6磷酸化水平的抑制作用。检测。

西宁生物

离体临床试验实践和需要考虑的困难

西宁生物在小分子药物和生物制剂的早期临床药效评价方面拥有丰富的经验。与传统的PK药物代谢、定量生物标志物或免疫原性分析方法相比，离体药效测试具有以下全部或部分重要差异和困难：

1.非定量检测。药效学检查药物引起体内生物物质的变化，例如PBMC中转录因子蛋白磷酸化水平的变化。这些变化所指示的目标分子往往没有标准，因此无法建立标准曲线。检测系统不会报告样本测试的具体结果。由于这种情况，在长期的样品分析过程中，信号值的变化不仅仅是由于药物的作用，而是为了表征药物引起的变化，由于信号值的变化检测方法或归一化后信号值的变化是必须得到变化的。同时，它还受到不同检测方法条件的影响，是多变量参数。因此，在进行离体药效研究时，保持不同天试验方法条件的严格一致性是获得药物相关临床药效试验结果的关键。

2.存在个体差异。除了药物诱导的作用外，离体药效学研究的结果还受到个体生物材料的显着影响。生物材料通常存在较大的个体差异（例如，个体PBMC在检测系统中具有不同的响应强度）。由于这种情况，有必要比较单个个体的给药前和给药后样本的药效学。例如，个体A可能会经历药物药效学结果的显着差异。该药物对个体没有影响B.个体药物的有效性必须根据个体能够触发的检测系统的响应强度来综合判断，并且必要时可以根据检测系统的响应强度对药物的药效进行分组。来分析效果个人可以触发的东西。

3.样品稳定性。离体药效学测试的测试样品具有多重属性：样品中的药物是测试物质，样品中的生物材料如全血是检测系统的试剂。尽管药物通常相对稳定，但用作检测试剂的生物材料却不然。检测系统中的全血稳定性通常在48至72小时内，有些项目需要不到24小时甚至8小时。应进行严格检查。样品的测试结果由样品中的药物浓度和样品的生物材料活性决定。在进行样品分析时，需要保证样品的生物材料活性处于最佳状态。对样品采集、运输和检测时间有严格要求。同时，由于需要在短时间内对样品进行分析，因此无法在一个分析批次中同时分析来自每个给药后血液采集点的样品。没有标准曲线的分析批次信号将导致检测结果出现更大的变异性。

4.样品刺激系统的建立。通常，健康人服用药物后，样品中的药物对样品中的生物物质没有明显的药效作用。为了使样品中的药物表现出药效学特性，必须刺激样品中的生物材料。刺激的选择、刺激时间、待检测分子以及检测平台都应根据药物的作用机制和生物材料的生理效应来设计。某些类型的药物需要某些类型的药物。方法。离体药效学测试过程中样品中生物物质的运输、储存和刺激可以显着影响测试结果，是整个分析方法的一个组成部分。在方法开发和验证过程中，决定方法是否适合实际应用的关键是在生物材料中添加药物以创建模拟样品以进行方法验证。

5.平台和人才熟练程度。体外药效学测试通常涉及两个部分：样品的刺激和目标检测分子的检测。样品刺激通常需要处理全血、PBMC 和其他生物材料。这是因为这类生物材料存在个体差异，稳定性较低。需要比较丰富的经验。同时，药效方法的检测平台也不同，可能会用到cell、ELISA、FACS、MSD、ELISPOT等检测技术。一次完整的Ex Vivo药效学研究要求较高，要求测试人员精通这两方面。人才与平台的综合能力。

6. 方法验证和数据报告系统设计。对于离体药效学测试没有明确的指南。由于是非定量检测，由于个体差异，无法根据免疫原性参数进行充分验证。采用适当的方法学方法来证明或表征方法的准确性、灵敏度、特异性、稳健性、稳定性、基质效应等参数，以确保其能够满足实际样品的检测需要，应根据验证系统的设计方式而定。许多考虑。

综上所述，离体药效分析方法是一种极具挑战性的分析方法，从方法设计、方法开发到方法验证，都需要人力资源和平台的高度熟练和经验。

西宁生物专业的体外药效评价团队基于对药物作用机制的了解和广泛的文献检索和研究，为客户提供早期临床药物的个性化临床药效评价解决方案，加速临床研发进展并支持尖端研究。欢迎有关临床药物研发管理的咨询和咨询。

精准生物技术

西宁生物

西宁生物科技是一家符合国际GLPGCP质量控制标准的专业高分子生物分析实验室，为国内外生物制药公司提供临床及临床前高分子生物分析（Bioanalysis，BA）和伴随诊断（Companion Diagnostics，CDx）。

一站式生物分析服务包括抗体制备和细胞系构建、样品采集试剂盒和实验室手册、符合法规要求的分析方法开发和验证以及样品分析。

涵盖药代动力学（PK）、药效学（PD）、抗药物抗体（ADA）、中和抗体（NAbs）以及生物标志物（Biomarker）检测。基于流式细胞术（FACS）和荧光定量PCR（qPCR）数字PCR（dPCR）平台的细胞疗法（CAR-T、CAR-NK等）和基因疗法以及细胞基因水平的PK和PD分析服务. 生物标志物测试服务。

伴随诊断产品开发服务包括LDT方法开发、CDx产品开发和验证、注册研究、临床试验研究和注册提交。

公司核心技术团队拥有10-25年的专业经验，其中包括在国际知名制药公司和CRO工作多年的海归博士、高分子生物分析专家、国内外专家等多名执行董事。美国的行业协会。他们参与了《中国药典2015版》《生物样本分析方法验证指导原则》、2023 NMPA 《药物免疫原性研究技术指导原则》并参与了多篇国际行业白皮书的撰写，支持了超过1000个全球多中心临床试验。对多种高分子产品进行了100多项临床研究，为众多国际重磅药物提供了上市审批数据支持，多次通过FDA、EMA、OECD审核，NMPA也已通过。

公司在美国宁波（西宁生物）、上海（京瀚生物）、新泽西州（Accurant Bio）设有实验室，总面积超过6500平方米，拥有超过150名科学家的团队。人们。我们与国内外约100家制药公司和生物技术公司建立了临床和临床前研究项目的合作关系，包括蛋白质药物、基因和细胞治疗药物、肿瘤免疫、自身免疫、低血糖等，涵盖多个热门治疗领域。多种生物大分子，包括超过15种双特异性抗体、超过28种基因和细胞治疗药物、40个正在开发的靶点以及180个临床试验。成功支持中国首个Car-T产品、中国首个一类新药药明康德（利吉亚奥伦塞注射液）上市。

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