《生化危机：0》 2002 年11 月11 日发布。
故事如下。 1998年7月23日，一列行驶在浣熊市郊区的雨伞列车遭到变异水蛭的袭击，与此同时浣熊市警察局向浣熊市派遣了STARS精锐队伍（Team Brava）前往浣熊市。在该市郊区，最近发生的多起残忍、食人、离奇的谋杀案正在接受调查。
队员们驾驶直升机前往事故频发的现场，但在中途，直升机的引擎因过度恐惧而停止运转，迫使队员迫降。然后他们发现了一辆受损的囚犯车辆和可怕的死亡。海军队长下令追查囚犯比利，而失散的0代女主角丽贝卡登上火车调查，却遇到了从未见过的僵尸和比利。
由于种种问题，两人开始合作，却不料来到安布雷拉公司位于浣熊市的实验室，发现马库斯博士已经变异并与水蛭融合，两人阻止了马库斯的复仇和逃跑。当他们一起工作时，丽贝卡改变了对比利的看法，然后就比利的死亡撒了谎。
《生化危机0》的历史可以追溯到1999年。卡普空在1999 年秋季东京游戏展上公布了N64 版本《生化危机0》。当时，Capcom 相信，由于N64 版本《生化危机2》 的成功，有可能在盒式媒体上发行《生化危机》。于是关于《生化危机0》的消息开始陆续公布。人们很快得知比利·科恩是游戏的新成员。 Capcom表示，在这款游戏中，玩家将解决《生化危机1》中剩余的几个谜题，并了解更多有关安布雷拉公司和STARS Bravo单位的信息。在2000年的E3展会和“东京春季游戏展”上，Capcom发布了《生化危机0》的20%完整试用版，设定是丽贝卡和比利共享屏幕并进行辅助动作。不过在E3之后，《生化危机1.5》和《生化危机0》一样，开始沉寂了一段时间，卡普空也不再公布有关该作的消息。有传言称该游戏已转移到其他平台，甚至可能已经停产。然而，2001年9月，三上真司发表了震惊业界的声明……
据《生化0》开发商透露，《生化危机0》的开发进展非常顺利，尽管有几次延迟。开发团队还认识到，单个盒式磁带的容量并不够，添加更多盒式磁带会显着增加成本。因此，该游戏被考虑移植到任天堂即将推出的NGC平台。所以虽然NGC的《生化危机0》在N64的基础上并没有真正改变太多，但屏幕上却发生了翻天覆地的变化。
在2002年E3展会上，NGC版本《生化危机0》正式公布。虽然重制版《生化危机》的超高水平图形表现并没有给玩家带来太大的惊喜，但因为是原创作品，仍然吸引了很多玩家的关注。 NGC 版本《生化危机0》 于2002 年11 月在美国和日本同时发布。虽然不可能重现过去的辉煌，但与NGC有限的所有权相比，游戏的销量已经相当不错了。迅速成为日本销售冠军，并进入美国前十名。在美国发售时，进行了大规模的促销活动，表现优于复刻版《生化危机0》。
布拉沃小队的直升机在浣熊市森林中坠毁，小队分头准备搜索该地区。在搜查火车时，丽贝卡遇到了杀人嫌疑犯比利。然后火车起飞并撞入安布雷拉训练设施附近的隧道，该训练设施由詹姆斯·马库斯博士、威斯克和威廉博士的前导师经营。然而，几年前他却神秘失踪。
似乎瑞贝卡和比利的一举一动都时刻受到威斯克和威廉的监视，而一个神秘的年轻人似乎在控制着他们的行动，并将威斯克和威廉视为敌人。原来，这个人就是詹姆斯博士，几年前被威斯克和威廉博士陷害，窃取了他们的实验结果，却因为这样的命运，感染了“山丘女王”病毒。最终，丽贝卡和比利利用了它对光的弱点，一下子将其摧毁了。
《生化危机》 的情节解开了该系列的许多谜团，也进一步揭示了威斯克和威廉博士的背景。游戏系统中还加入了许多新元素。尽管删除异次元盒子设置让一些玩家感到不舒服，但它也引入了全新的游戏玩法。此外，最明显的特点是玩家必须不断地在两个主角之间切换才能顺利玩游戏。还有，解谜需要两个人的配合，两个人一起战斗也是有效的。非常有趣的战斗方式。另外，这款游戏是系列中难度最高的，弹药极其有限，往往很难节省子弹来准备BOSS战。
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